Utilización del ADN ribosomal 18S para la identificación de Hongos Micorrízicos Arbusculares que colonizan plantas de aguacate (Persea americana Mill.)

Abstract

En el presente trabajo se establecieron condiciones para identificarespecies de Hongos Micorrízicos Arbusculares (HMA) asociados araíces de plantas de aguacate, mediante el análisis de las secuenciasde ADN ribosomal y correlacionarlos con los HMA presentes en unsuelo como esporas. La extracción y purificación de ADN genómicose realizó mediante el protocolo indicado por el Mini Kit DNeasy(Qiagen). Para la evaluación del ADN obtenido a partir de raícesse usó la técnica de PCR utilizando los primers universales paraeucariontes (NS1-ITS4) que permitan inicialmente la amplificacióndel gen de la subunidad ribosomal 18S (ADNr 18S), y posteriormentemediante oligonucleótidos específicos (VAGIGA, VAGLO, VAACAUen combinación con NS31, amplificar secuencias específicas deHMA (PCR anidada), de los diferentes géneros y posibles especiesde HMA, que colonizan la raíz. Los productos amplificados de laPCR anidada se purificaron y fueron verificadas por secuenciación.Las secuencias generadas en este trabajo fueron comparadas conlas especies registradas en el BEG (La Banque Européenne desGlomales) y en el National Center of Biotechnology Information(NCBI). Se encontraron índices elevados de colonización micorrízica(80-100%). Las secuencias amplificadas permitieron determinar queGlomus geosporum se encuentra colonizando plantas de aguacate.